Legionella reagens för direkt fluorescensantikroppstest
Direkt fluorescerande antikroppsreagens är avsett för presumtiv (serologisk) identifiering av Legionella pneumophila serogrupp 1 från kulturisolat.
Legionella pneumophila serogrupp 1 är den vanligaste orsaken för legionärssjuka och ett av de vanligast identifierade Legionellaisolaten i miljöprover.
Den vanligaste tillgängliga tekniken som används för laboratoriebekräftelse vid identifiering av Legionellaisolat är serologiska metoder som baseras på hyperimmuna kaninantisera som innehåller antikroppar riktade mot den somatiska lipopolysackariden eller "O" antigen. Dock har många arter av Legionella och serogrupper gemensamma antigener, korsreaktioner kan ske när polyklonala antikroppar används för serologisk identifiering. Legionella pneumophila serogrupp 1 DFA kit använder FITC märkt monoklonala antikroppar som erbjuder en mycket känslig och specifik identifiering av Legionella pneumophila serogrupp 1.
Legionella kan odlas från en mängd olika kliniska prover och testet fluorescent antikropp (DFA) används för att identifiera Legionella i sådana kulturer. Även om DFA testet är känsligt och mycket specifikt bör diagnosen bekräftas genom biokemisk karaktärisering när det är möjligt.
Monoklonala antikroppar riktade mot Legionella pneumophila serogrupp 1-antigener är konjugerade till fluorokromen, fluoresceinisotiocyanat (FITC) för att bilda en FITC-märkt antikropp-reagens.
Isolat som skall testas fixeras på ett objektglas och täcks med det monoklonala antikroppsreagenset. FITC-märkta antikroppar binder specifikt till något Legionella pneumophila serogrupp 1 antigen närvarande i isolatet. Om inget Legionella serogrupp 1 antigen finns närvarande binds inte antikroppsreagenset och avlägsnas i tvättsteget.
FITC-märkt antikropp-antigenkomplex detekteras genom exponering av objektglaset för ultraviolett eller blå-violett ljus. Excitation med ultraviolett eller blåviolett ljus orsakar FITC att fluorescera på längre (synlig) våglängder som producerar en blå/grön eller gul/grön färg. Legionella-celler visas som ljust gul-gröna baciller under dessa förhållanden.